跑出来内参条带难看的话，多半是做胶没做好导致的。这里讲讲做出来内参这样的话怎么办：

没错，跑出来的内参都不齐是吧，理想上内参应该是这样的是吧：

这种问题有几个可能性，一个是蛋白抽提后，没有认真去做蛋白定量，也就是没有大约摸定一下蛋白有多少浓度，导致上样量不一致。当然，就按照内参压出来的浓度来调整上样量就行了。不过，一定要注意的是，这个是在条带差距不大的情况下使用，要是真的内参差异特别大，还需要有别的考量。还有一种就是内参都特别深，没有比较的意义，怎么说呢，WB压片也是有范围的，如果做标曲的话，大概是这样：

也就是说尽量使用线性区范围浓度的上样量，别浓度太高，导致没法分析，这种时候需要降低点上样量。

最关键的一点，就是你有没有选对内参，是不是一直都选GAPDH或者Tubulin之类的？你要确定一下，是不是适合你的实验：

比如虽然Actin和Tubulin都可以用做全细胞的WB内参，但是这两个内参都不适用于年龄差距特别大的样本，而GAPDH不适用于与氧相关的研究。核内参Lamin B1不适用与胚胎干细胞，血清蛋白内参Transferrin会受到维甲酸之类的药物影响。还有的蛋白内参15-17kDa，如果你检测蛋白和这个差不多大小，就不建议用这个内参。方方面面都要考虑到。

如果你尝试了很多次，在蛋白定量很OK的情况下，内参还是不齐，那就很有可能是你选的内参表达量本身就不一致，需要考虑换内参了。

当然，如果你跑出来的内参差异不大的话，比如这样：

就已经很不错了，接下去就均一化（第1泳道数值不会变）：

然后计算一下倍数就行了（第1泳道的倍化肯定就是1）。

总结一下哈，怎么夏季把调内参：

1）选择正确且表达稳定的内参

2）蛋白做好定量

3）按照第一次内参的深浅略微调整上样量

4）确定线性浓度，不要浓度太高

5）数据均一化